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    鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒反應(yīng)的準(zhǔn)備及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

    點(diǎn)擊次數(shù):772次  更新時(shí)間:2021-05-20
       鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒反應(yīng)的準(zhǔn)備:
      待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌,戴防護(hù),并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。
     
      鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
      1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
     
      2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
     
      3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
     
      4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
     
      實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量和定性分析。
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