感覺態(tài)細胞描述的是細胞所處的一種狀態(tài)，在這種狀態(tài)下，細胞膜可以允許外源重組質(zhì)粒進入細胞內(nèi)部，且不會被限制性核酸內(nèi)切酶水解。
感覺態(tài)細胞的實驗操作步驟：
將電轉(zhuǎn)杯和微量離心管至于冰上。
從冰箱取出電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞，放置在冰盒中直至*融化。
當細胞溶解*后，輕輕拍打混勻。取出細胞至置于冰上的預冷微量離心管中。
如果使用克隆或連接試劑盒的連接Buffer，取熱滅活的連接產(chǎn)物到細胞中（沒有進行熱滅活的連接產(chǎn)物會抑制轉(zhuǎn)化反應(yīng)），用槍頭輕輕攪動；不要上下吹打混勻，這樣會產(chǎn)生氣泡并使細胞升溫。使用連接產(chǎn)物會引起電轉(zhuǎn)過程中的電弧。
輕輕的將細胞/DNA混合物轉(zhuǎn)移至預冷的電轉(zhuǎn)杯中，注意避免產(chǎn)生氣泡。用手指快速地將試管向下輕彈，使細胞沉積在井電轉(zhuǎn)杯的底部。根據(jù)以上推薦的電轉(zhuǎn)條件進行電轉(zhuǎn)。
在脈沖10s內(nèi)，加RecoveryMedium到電轉(zhuǎn)杯，用槍上下吹打重懸細胞，然后將含有細胞的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無菌培養(yǎng)管中。
將培養(yǎng)管放在搖床上，37℃培養(yǎng)1h。
從培養(yǎng)管中取轉(zhuǎn)化后的細胞涂布于含特定抗生素的LB（或其他培養(yǎng)基）瓊脂糖平板上。
注意事項
?、?00nm波長處的OD值超過0.5要重新接種，重新培養(yǎng)；
?、谠撨^程中所有用到的培養(yǎng)基均是無抗性的。
滬ICP備14030958號-14 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap